خبریں

جاوا اسکرپٹ فی الحال آپ کے براؤزر میں غیر فعال ہے۔اگر جاوا اسکرپٹ غیر فعال ہے تو اس ویب سائٹ کی کچھ خصوصیات کام نہیں کریں گی۔
اپنی مخصوص تفصیلات اور دلچسپی کی مخصوص دوائی کے ساتھ رجسٹر کریں، اور ہم آپ کی فراہم کردہ معلومات کو ہمارے وسیع ڈیٹا بیس میں مضامین کے ساتھ ملائیں گے اور آپ کو فوری طور پر پی ڈی ایف کاپی ای میل کریں گے۔
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Department of Infectious Diseases, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu Province, 215000 Tel.14.1٪ کی 5 سالہ مجموعی بقا کے ساتھ نظام انہضام کے ٹیومر۔ایچ سی سی کے بہت سے مریضوں کی تشخیص ایک اعلی درجے کے مرحلے پر ہوتی ہے، لہذا ایچ سی سی سے اموات کو کم کرنے کے لیے جلد اسکریننگ ضروری ہے۔سیرم الفا فیٹوپروٹین (AFP)، لینس لیکٹین-ری ایکٹیو الفا-فیٹوپروٹین (AFP-L3)، اور غیر معمولی پروتھرومبن (وٹامن K کی کمی سے متاثرہ پروٹین II، PIVKA-II) جیسے عام طور پر استعمال ہونے والے پتہ لگانے کے اشارے کے علاوہ، سیال بایپسی تکنیک۔ ایچ سی سی کے پتہ لگانے میں اسے تشخیصی قدر کا دکھایا گیا ہے۔ناگوار طریقہ کار کے مقابلے میں، سیال بایپسی گردش کرنے والے مہلک میٹابولائٹس کا پتہ لگا سکتی ہے۔فلوئڈ بایپسی تکنیک گردش کرنے والے ٹیومر کے خلیوں، گردش کرنے والے ٹیومر DNA، گردش کرنے والے RNA، اور exosomes کا پتہ لگاتی ہیں اور HCC کی ابتدائی اسکریننگ، تشخیص، اور تشخیصی تشخیص کے لیے استعمال ہوتی ہیں۔یہ مضمون مالیکیولر بائیولوجی اور مختلف فلوئڈ بایپسی تکنیکوں کے استعمال کا جائزہ لیتا ہے تاکہ امید افزا بائیو مارکروں کو الگ کیا جا سکے جو کہ HCC کے ابتدائی تشخیص کے لیے قابل عمل اختیارات ہو سکتے ہیں تاکہ ہائی رسک HCC گروپوں کی ابتدائی اسکریننگ کو بہتر بنایا جا سکے۔مطلوبہ الفاظ: سیال بایپسی تکنیک، ہیپاٹو سیلولر کارسنوما، ہائی رسک گروپ۔
Hepatocellular carcinoma (HCC) نظام انہضام کا ایک عام مہلک ٹیومر ہے، جو مردوں اور عورتوں دونوں میں مہلک ٹیومر کے نئے کیسز میں چھٹے نمبر پر ہے۔1 دنیا بھر میں، جگر کا کینسر پھیپھڑوں اور کولوریکٹل کینسر کے بعد کینسر سے ہونے والی اموات کی تیسری بڑی وجہ ہے، جو کہ تمام مہلک نوپلاسموں سے ہونے والی کینسر سے ہونے والی اموات کا 8.3 فیصد ہے۔1 ایچ سی سی کی تشخیص کا تشخیص کے مرحلے سے گہرا تعلق ہے۔ایچ سی سی میں خراب بقا کی بنیادی وجوہات انٹرا ہیپیٹک میٹاسٹیسیس، پورٹل وینس ٹیومر تھرومبی اور ڈسٹنٹ میٹاسٹیسیس ہیں جو ریسیکشن کو روکتے ہیں، اور ان میں سے بہت سی خصوصیات تشخیص کے وقت مریضوں میں پہلے سے موجود ہوتی ہیں۔
تشخیصی اور علاج کے رہنما خطوط کی بنیاد پر، ایچ سی سی کی نشوونما کے لیے اہم خطرے والے عوامل جگر کی سروسس، دائمی ہیپاٹائٹس بی وائرس (HBV) یا ہیپاٹائٹس سی وائرس (HCV) انفیکشن، الکوحل سے متعلق فیٹی جگر کی بیماری، اور غیر الکوحل فیٹی جگر کی بیماری (NAFLD) ہیں۔ )۔2 اس کے علاوہ، ایچ سی سی کے خطرے کے عوامل میں افلاٹوکسین سے آلودہ کھانے کی مقدار، اسکسٹوسومیاسس، سروسس کی دیگر وجوہات، جگر کے کینسر کی خاندانی تاریخ، ذیابیطس، موٹاپا، سگریٹ نوشی، اور منشیات کی وجہ سے جگر کی چوٹ شامل ہیں۔35- اور 45 سالہ ہائی رسک گروپس کو باقاعدگی سے میڈیکل چیک اپ کروانا چاہیے۔ایچ سی سی کے مریضوں کی مجموعی بقا کو بہتر بنانے کے لیے ابتدائی اسکریننگ ابتدائی علاج کی ایک اہم حکمت عملی ہے۔
HCC3,4 کی جلد اسکریننگ کے لیے بائیو مارکر جیسے AFP، AFP-L3 اور PIVKA-II کی سفارش کی جاتی ہے۔مائع بایپسی تکنیکوں نے ابتدائی تشخیص اور علاج کی تشخیص میں امید افزا نتائج دکھائے ہیں۔5,6 HCC مائع بایپسی میں نمایاں پیش رفت ہوئی ہے، جس میں عام طور پر استعمال ہونے والے سیرم مارکر جیسے AFP (ٹیبل 1) سے زیادہ حساسیت اور مخصوصیت ہو سکتی ہے۔
AFP HCC میں بڑے پیمانے پر استعمال ہونے والا بائیو مارکر ہے اور اس وقت بیماری کی ابتدائی اسکریننگ، تشخیص اور تشخیص کے لیے سب سے زیادہ تفصیلی بائیو مارکر ہے۔ایک مستقل طور پر بلند ہونے والی AFP کی سطح کو HCC کی ترقی کے لیے ایک خطرے کا عنصر سمجھا جاتا ہے۔7,8 چھوٹے ہیپاٹو سیلولر کارسنوما (sHCC) کی کھوج کی شرح الٹراساؤنڈ اور کمپیوٹیڈ ٹوموگرافی کی ترقی کے ساتھ بڑھ رہی ہے، اور AFP کو کلینیکل پریکٹس میں hHCC کی کھوج کے لیے خاص طور پر غیر حساس پایا گیا ہے۔ایک سابقہ ​​ملٹی سینٹر اسٹڈی9 کے مطابق، AFP مثبت پایا گیا 46% (616/1338) HCC کیسز اور 23.4% (150/641) sHCC کیسز میں۔اس کے علاوہ، جگر کی دائمی بیماری اور سروسس کے مریضوں میں اے ایف پی کی سطح بلند ہوتی ہے۔10 اس طرح، AFP کا sHCC کے لیے اسکریننگ کا ایک محدود اثر ہے۔11 ایشیا پیسیفک کلینیکل پریکٹس گائیڈ لائنز برائے ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے مطابق اے ایف پی کے استعمال کی سفارش نہیں کی جاتی ہے۔ ایچ سی سی میں ایک اعلی تشخیصی قدر۔13 ٹشو بایپسی کے مقابلے میں، سیال بایپسی بنیادی طور پر جسم کے رطوبتوں (خون، تھوک، فوففس سیال، دماغی اسپائنل سیال، یا پیشاب) میں ٹیومر سے وابستہ میٹابولائٹس کا پتہ لگاتی ہے اور یہ ٹشوز پر کم حملہ آور ہوتی ہے۔14 اس کے علاوہ، مائع بایپسی پرائمری ٹیومر ٹشو میں موجود نہ ہونے والی مہلک خصوصیات کی عکاسی کر سکتی ہے۔15 لیکویڈ بایپسیز کا ابھی تک کلینیکل پریکٹس میں تمام قسم کے ٹیومر کے لیے تجربہ نہیں کیا جا رہا ہے، لیکن کینسر میں ان کی تشخیصی صلاحیت ماہرینِ آنکولوجسٹ کی توجہ مبذول کر رہی ہے۔16 فلوئڈ بایپسی گردش کرنے والے ٹیومر سیلز (CTCs)، گردش کرنے والے ٹیومر DNA (cDNA)، گردش کرنے والے فری RNA (ecRNA)، اور exosomes کا پتہ لگا سکتی ہے۔اس آرٹیکل میں، ہم ہائی رسک ایچ سی سی گروپس کی ابتدائی اسکریننگ میں مختلف فلوئڈ بایپسی تکنیکوں کی خصوصیات، کردار اور ان کے اطلاق پر تبادلہ خیال کریں گے۔
صحت مند افراد کے خون کے نمونوں میں ایکسٹرا سیلولر ڈی این اے (سی ایف ڈی این اے) پہلی بار 1948 میں مینڈیل ایٹ ال نے بیان کیا تھا۔17 cfDNA سیل سے پاک DNA کا ٹکڑا ہے جس کی لمبائی تقریباً 160-180 bp ہے، جو بنیادی طور پر لیمفوسائٹس اور مائیلوڈ خلیوں سے نکلتی ہے۔سی ٹی ڈی این اے ایک مخصوص اتپریورتی ڈی این اے کا ٹکڑا ہے جو ٹیومر کے خلیوں کے ذریعے پردیی خون میں جاری کیا جاتا ہے، جو بعض پیتھوفزیولوجیکل عمل کے بعد ٹیومر کے خلیوں کی جینومک معلومات کی نمائندگی کرتا ہے، بشمول نیکروسس، اپوپٹوسس، اور اخراج۔کل cfDNA میں ctDNA کا تناسب ٹیومر کی قسم کے ساتھ وسیع پیمانے پر مختلف ہوتا ہے، اور cDNA کے ٹکڑوں کی لمبائی عام طور پر 167 bp سے کم بتائی جاتی ہے۔18 انڈر ہیل کے مطالعے سے معلوم ہوا کہ cfDNA کے ٹکڑے عام طور پر عام cfDNA سے چھوٹے ہوتے ہیں۔19 صحت مند افراد کے مقابلے میں، کینسر کے مریضوں کے خون میں cfDNA کے ٹکڑوں کی کل لمبائی کم ہوتی ہے، اس لیے cfDNA کو ابتدائی ٹیومر اسکریننگ کے اشارے کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے۔سی ایف ڈی این اے فریگمنٹ کی لمبائی کے کچھ ذیلی سیٹوں کی افزودگی غیر میٹاسٹیٹک ٹھوس ٹیومر سے وابستہ سی ڈی این اے کی کھوج کو بہتر بنا سکتی ہے۔مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ سی ٹی ڈی این اے 75 فیصد سے زیادہ جدید لبلبے، بڑی آنت، مثانے، معدے، جگر، رحم، چھاتی، میلانوما، اور سر اور گردن کے کینسر میں پایا جاتا ہے۔20,21 تاہم، خون میں ctDNA کی مقدار ٹیومر کے مقام پر منحصر ہے۔Bettegoud کی ایک تحقیق میں، بڑی آنت، چھاتی، جگر، پھیپھڑوں اور پروسٹیٹ کے کینسر والے مریضوں کے خون میں سی ڈی این اے کی سطح دوسرے کینسروں کے مقابلے میں زیادہ پائی گئی۔اس کے برعکس، منہ کے کینسر، لبلبے کے کینسر، گیسٹرک کینسر، اور گلیوما کے مریضوں میں، خون میں سی ڈی این اے کی حراستی کم تھی۔اکیس
چونکہ ctDNA میں بنیادی ٹیومر خلیوں کی طرح جینیاتی تغیرات ہوتے ہیں، اس لیے cDNA کو ٹیومر سے متعلق مخصوص تغیرات اور ایپی جینیٹک تبدیلیوں کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، بشمول میتھیلیشن، ہائیڈروکسی میتھیلیشن، سنگل نیوکلیوٹائڈ تغیرات، اور کاپی نمبر کی مختلف حالتیں۔تئیس
ڈی این اے میتھیلیشن سب سے عام ایپی جینیٹک تبدیلیوں میں سے ایک ہے جس کے نتیجے میں جین جبر ہوتا ہے۔عام خلیات کے مقابلے میں، ٹیومر سیل جینوم کی میتھیلیشن کی مجموعی سطح میں فرق ہے، خاص طور پر ٹیومر کو دبانے والے جینز کے میتھیلیشن میں، جن کا ابتدائی مرحلے میں پتہ لگایا جا سکتا ہے، یہ تجویز کرتا ہے کہ ڈی این اے میتھیلیشن میں تبدیلیاں جلد کی نشوونما کا اشارہ ہو سکتی ہیں۔ tumorigenesis کا پتہ لگانا.ایچ سی سی سے وابستہ ٹیومر دبانے والے جینوں کو پروموٹر میتھیلیشن کے ذریعہ غیر فعال کیا جاسکتا ہے ، اس طرح ٹیومرجینیسیس کو متحرک کیا جاسکتا ہے۔24 ڈی این اے میتھیلیشن ٹیومر کی ابتدائی تشخیص کے لیے اس کی بافتوں کی مخصوصیت، شناخت کی اہلیت، اور عمر کی آزادی کی وجہ سے ایک مثالی نشان ہے۔اس کے علاوہ، ڈی این اے میتھیلیشن سومیٹک تغیرات کے مقابلے میں زیادہ عام ہے کیونکہ ہدف کے جینوم کے ہر علاقے میں زیادہ ہدف والے علاقے اور متعدد تبدیل شدہ سی پی جی سائٹس موجود ہیں۔25 متعدد سی پی جی سائٹس کے علاوہ، ڈی بی ایکس 2، ٹی ایچ وائی1، ایم ٹی 1 ایم، INK4A، VIM، FBLN1، اور RGS10.26 Xu et al میں ctDNA میں بڑی تعداد میں آزاد ہائپرمیتھلیٹیڈ لوکی کی نشاندہی کی گئی ہے۔ایچ سی سی کے 1098 مریضوں اور 835 صحت مند کنٹرولوں کے سی ایف ڈی این اے نمونوں کا موازنہ ایچ سی سی سے وابستہ جینز اسی پلازما سی ڈی این اے میتھیلیشن دستخطوں کے ساتھ مضبوطی سے تعلق رکھتے ہیں۔25 لیبارٹری تجزیہ کی بنیاد پر، ایک پیشن گوئی ماڈل تیار کیا گیا تھا جس میں بالترتیب 85.7٪ اور 94.3٪ کی حساسیت اور مخصوصیت کے ساتھ 10 میتھیلیشن مارکر تھے، اور یہ مارکر ٹیومر کے بڑے پیمانے، ٹیومر کے مرحلے، اور علاج کے ردعمل کے ساتھ انتہائی مربوط تھے۔یہ نتائج بتاتے ہیں کہ سی ڈی این اے میتھیلیشن مارکر کا استعمال ایچ سی سی کی تشخیص، نگرانی اور تشخیص میں بہت بڑا وعدہ رکھتا ہے۔Lu et al27 کے ذریعہ پیش کردہ تین غیر معمولی میتھلیٹڈ جینز (APC, COX2, RASSF1A) اور ایک miRNA (miR203) پر مشتمل میتھیلیشن ماڈل میں، HBV سے وابستہ HCC کی تشخیص کے لیے ماڈل 27 کی حساسیت اور خصوصیت کا موازنہ کیا جا سکتا ہے۔80%اس کے علاوہ، ماڈل 20 ng/mL کی AFP سطح کے ساتھ 75% غیر تشخیص شدہ HCC مریضوں کا پتہ لگا سکتا ہے۔راس سے وابستہ ڈومین فیملی 1A پروٹین (RASSF1A) کا جین انسانی جینوم میں اہم بار بار ہونے والا DNA ترتیب ہے۔اراؤجو وغیرہ۔نے یہ نتیجہ اخذ کیا کہ RASSF1A پروموٹر کا ہائپرمیتھیلیشن ایچ سی سی کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے ایک قیمتی بائیو مارکر اور ایپی جینیٹک تھراپی کے لیے ایک ممکنہ مالیکیولر ہدف ہو سکتا ہے۔28 ایک مطالعہ میں، HCC والے 73.3% مریضوں میں سیرم RASSF1A پروموٹر ہائپرمیتھیلیشن پایا گیا۔29 لانگ انٹرسپرسڈ نیوکلیوٹائڈ عنصر 1 (لائن -1) ایک اور انتہائی فعال ریٹرو ٹرانسپوزیشن ثالث ہے۔LINE-1 کا Hypomethylation HCC سیرم کے 66.7% نمونوں کے DNA میں پایا گیا تھا اور اس کا تعلق ابتدائی تکرار اور ریڈیکل ریسیکشن کے بعد خراب بقا سے تھا۔29 Hypermethylation ایک عام جینیاتی عمل ہے جو جگر کے سرروسس اور HCC کی نشوونما میں ایک منفرد کردار ادا کرتا ہے۔30 اس کے برعکس، ہائیڈروکسی میتھیلیشن ایک ڈیمیتھیلیشن عمل ہے جو جین کو دوبارہ فعال کرنے اور اظہار کو اکساتا ہے، اور اس عمل میں 5-ہائیڈرو آکسیمیتھیلسیٹوسین (5-hmC) پروڈکٹ کی کھوج کو ٹیومر کی شناخت کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔سی ڈی این اے کا میتھیلیشن اور ہائیڈروکسی میتھیلیشن ٹیومرجینیسیس سے وابستہ ہیں اور ایچ سی سی کی ابتدائی اسکریننگ میں حصہ ڈال سکتے ہیں۔2554 مضامین کے مطالعہ میں، cfDNA نمونوں میں 31 جینوم وسیع 5-hmCs پائے گئے، اور HCC کے مریضوں اور زیادہ خطرہ والے گروپوں جیسے کہ دائمی بیماریوں میں مبتلا افراد میں 5-hmC ترتیبوں کا موازنہ کرکے 32 جینوں کی شناخت کی گئی۔جگر کی بیماریوں کے تشخیصی ماڈل۔اور سروسس.یہ ماڈل HCC کو غیر ٹیومر ٹشو سے ممتاز کرنے میں AFP سے برتر تھا۔
کوڈنگ والے علاقوں میں تغیرات نقلی اسامانیتاوں کا باعث بن سکتے ہیں، جو پروٹین کی ترتیب میں تبدیلی اور بالآخر کینسر کا باعث بن سکتے ہیں۔سنگل نیوکلیوٹائڈ مختلف قسمیں ٹیومر کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے اہم جینومک مارکر ہیں کیونکہ ان کی اعلی بافتوں کی بھروسے اور اعلی ٹیومر اور بافتوں کی خصوصیت ہے۔کینسر کے exome اور پورے جینوم کی ترتیب کے لیے نیکسٹ جنریشن سیکوینسنگ (NGS) کا استعمال کرتے ہوئے HCC سے متعلق متعدد مطالعات نے عام تبدیل شدہ سیلولر جینز جیسے TP53 اور CTNNB1 کی نشاندہی کی ہے، ساتھ ہی ساتھ کئی جن میں ARID1A، MLL، IRF2 بھی شامل ہیں۔نئے جین، ATM، CDKN2A، FGF19، PIK3CA، RPS6KA3 اور JAK1 اعتدال پسند تغیر کی شرح دکھاتے ہیں۔ اتپریورتی جین فنکشن کا تجزیہ بتاتا ہے کہ کرومیٹن کی دوبارہ تشکیل، Wnt/β-catein اور JAK/STAT سگنل کی نقل و حمل، P53-سیل سائیکل پاتھ وے، ایپی جینیٹک موڈیفائر، آکسیڈیٹیو تناؤ کے راستے، PI3K/AKT/MTOR/RASFRAF اور RASF کے راستے میں تبدیلیاں۔ MAPK kinase پاتھ وے HCC oncogenesis میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ 32,33 ایک مطالعہ میں جس میں ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کا پتہ چلا، ہوانگ ایٹ ال نے پایا کہ ctDNA پر منحصر ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کی تعدد 19.5% تھی، اور مخصوصیت 90% تھی۔ .34 اس کے علاوہ، جن مریضوں نے عروقی حملے کا تجربہ کیا ان میں ctDNA اتپریورتن (P = 0.041) اور مختصر تکرار سے پاک بقا (P <0.001) ہونے کا زیادہ امکان تھا۔ اتپریورتی جین فنکشن کا تجزیہ بتاتا ہے کہ کرومیٹن کی دوبارہ تشکیل، Wnt/β-catein اور JAK/STAT سگنل کی نقل و حمل، P53-سیل سائیکل پاتھ وے، ایپی جینیٹک موڈیفائر، آکسیڈیٹیو تناؤ کے راستے، PI3K/AKT/MTOR/RASFRAF اور RASF کے راستے میں تبدیلیاں۔ MAPK kinase پاتھ وے HCC oncogenesis میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ 32,33 ایک مطالعہ میں جس میں ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کا پتہ چلا، ہوانگ ایٹ ال نے پایا کہ ctDNA پر منحصر ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کی تعدد 19.5% تھی، اور مخصوصیت 90% تھی۔ .34 اس کے علاوہ، جن مریضوں نے عروقی حملے کا تجربہ کیا ان میں ctDNA اتپریورتن (P = 0.041) اور مختصر تکرار سے پاک بقا (P <0.001) ہونے کا زیادہ امکان تھا۔اتپریورتی جین فنکشن کا تجزیہ بتاتا ہے کہ کرومیٹن ریموڈلنگ، Wnt/β-catenin اور JAK/STAT سگنلنگ، P53 سیل سائیکل پاتھ وے، ایپی جینیٹک موڈیفائر، آکسیڈیٹیو سٹریس پاتھ وے، PI3K/AKT/MTOR پاتھ وے، اور RAS/RAF/MAPK وے پلے پاتھ وے میں تبدیلیاں۔ HCC tumorigenesis میں ایک اہم کردار۔ 32,33 ایک مطالعہ میں جس میں ٹیومر سے وابستہ تغیرات پائے گئے، ہوانگ ایٹ ال۔پتہ چلا کہ ctDNA پر منحصر ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کی تعدد 19.5٪ تھی اور خصوصیت 90٪ تھی۔. .34 اس کے علاوہ، عروقی حملے کے مریضوں میں زیادہ سی ڈی این اے اتپریورتن (P = 0.041) اور ایک مختصر بیماری سے پاک بقا (P <0.001) تھی۔اتپریورتی جینوں کے فنکشنل تجزیے سے انکشاف ہوا کہ کرومیٹن ریموڈلنگ، Wnt/β-catein اور JAK/STAT سگنلنگ، P53 سیل سائیکل پاتھ وے، ایپی جینیٹک موڈیفائر، آکسیڈیٹیو اسٹریس پاتھ وے، PI3K/AKT/MTOR پاتھ وے، اور RAS/PAKMAFRAF kinase پاتھ وے HCC کے oncogenesis میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ 32،33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 的 研究 中 ， ， Huang 等 人 发现 肿瘤 相关 相关 突变 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 Ctdna 的 为 为 19.5 ٪ ， 特异性 为 90 ٪ .34 此外 经历 血管 血管 血管 侵犯 更 有 有 有 有 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）۔ 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 的 ， ， ， ， ， 发现 突变 突变 依赖于 依赖于 Ctdna 的 为 为 19.5 ٪ ， 特异性 为 为 90 ٪ .34 此外 经历 血管 侵犯 更 可能 可能 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生 CTDNA 突变 （P = 0.041）短的无复发生存期（P<0.001）۔32,33 ایک مطالعہ میں جس میں ٹیومر سے وابستہ تغیرات پائے گئے، ہوانگ ایٹ ال۔پتہ چلا کہ ٹیومر سے وابستہ اتپریورتنوں کا انحصار 19.5% cDNA پر تھا جس کی خاصیت 90% 34 تھی۔ اس کے علاوہ، وہ مریض جو عروقی حملے سے گزر چکے تھے ان میں cDNA کی نشوونما کا زیادہ امکان تھا۔мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001)۔ اتپریورتن (P = 0.041) اور چھوٹی بیماری سے پاک بقا (P <0.001)۔ایک اور عام HCC ڈرائیور جین TP53 ہے، جس کی تبدیلی کی شرح 30% سے زیادہ ہے۔مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ خون اور پیشاب میں ctDNA میں TP53 تغیرات کی تعدد 5% سے 60% تک ہوتی ہے۔35 جوہان کے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ دیر سے ایچ سی سی میں سی ٹی ڈی این اے میوٹیشن اسپیکٹرم میں ابتدائی ایچ سی سی کی طرح ہی اتپریورتن کی شرح ہے، بشمول TERT پروموٹر (51%)، TP53 (32%)، CTNNB1 (17%)، PTEN (8%)، اتپریورتن AXIN1، ARID2، KMT2D اور TSC2 (6% ہر ایک)۔β-کیٹنین (CTNNB1) oncogene Wnt سگنلنگ پاتھ وے میں اہم کردار ادا کرتا ہے۔ٹرانسکرپشن کو ایکٹیویٹر CTNNB1 جین کے اظہار کو فروغ دے سکتا ہے، جو سیل کے پھیلاؤ، اپوپٹوسس کی روک تھام، اور انجیوجینیسیس کا باعث بن سکتا ہے۔CTNNB1 ہیپاٹوسائٹ کی تبدیلی کو دلانے کے لیے TERT کے ساتھ بھی بات چیت کر سکتا ہے۔33 TERT پروموٹر اکثر کچھ ٹھوس ٹیومر میں تبدیل ہوتا ہے۔ٹی ای آر ٹی میں تبدیلیاں، ایچ سی سی کی مہلک تبدیلی میں ابتدائی جینیاتی تبدیلیوں میں سے ایک، سیرروٹک ہیپاٹوسائٹس میں ٹیلومیرز کے دوبارہ فعال ہونے کا باعث بن سکتی ہے اور پھیلاؤ کو فروغ دے سکتی ہے اور عمر بڑھنے سے روک سکتی ہے۔33-37 TERT پروموٹر میں اتپریورتن 59-90% مریضوں میں پھیلنے والے جگر کے نوڈولس اور ابتدائی HCC کے ساتھ ہونے کی اطلاع دی گئی ہے اور ان کا تعلق بقا سے ہے۔38
کاپی نمبر تبدیلیاں (CNA) صوماتی تغیرات کی ایک اہم ذیلی قسم ہے۔تحقیق سے پتہ چلتا ہے کہ CNA کا وسیع اور فوکل بوجھ ایک جینومک دستخط ہے جو ٹیومر کی مدافعتی دراندازی اور کینسر کی کچھ اقسام میں خارج ہونے کی پیش گوئی کرنے کے قابل ہے۔39 فعال دراندازی سگنلنگ، ہائی سائٹولائٹک سرگرمی، شدید سوزش اور ایچ سی سی میں اینٹیجن پریزنٹیشن سے وابستہ جینیاتی مارکر۔477 مضامین میں واحد نیوکلیوٹائڈ پولیمورفیزم کے ڈیٹا سرنی کے تجزیہ سے CNS پر کم بوجھ کا انکشاف ہوا۔اس کے برعکس، ایک اعلی وسیع CNA بوجھ کے ساتھ کروموسومی طور پر غیر مستحکم ٹیومر نے مدافعتی رد کی علامات ظاہر کیں اور ان کا تعلق پھیلاؤ، ڈی این اے کی مرمت، اور TP53 dysfunction سے تھا۔Xu et al.سے پتہ چلتا ہے کہ ایچ سی سی گروپ کے سی این اے اسکور دائمی جگر کی بیماری والے گروپ سے زیادہ تھے۔40 ایک خلیے کی مکمل جینوم کی ترتیب کا استعمال کرتے ہوئے، CNAs ہیپاٹو کارسینوجینیسیس میں ابتدائی طور پر ظاہر ہوتے پائے گئے اور ٹیومر کے بڑھنے کے دوران نسبتاً مستحکم رہتے ہیں۔41 چنگ وغیرہ۔نے پایا کہ ایچ سی سی کے مریضوں میں سی ایف ڈی این اے کی سطح نمایاں طور پر بلند ہوئی تھی اور سی ایف ڈی این اے میں جینوم وائڈ سی این اے صرافینیب کے ساتھ علاج کیے جانے والے ایچ سی سی کے مریضوں میں ایک اہم آزاد پروگنوسٹک مارکر تھے۔42 زیادہ سی این اے بوجھ والے مریضوں میں سی این اے کا بوجھ کم رکھنے والوں کے مقابلے میں بیماری کے بڑھنے اور موت کے امکانات زیادہ تھے۔Ollerich et al.پتہ چلا کہ کاپی نمبر انسٹیبلٹی انڈیکس (CNI) کینسر کے مریضوں کے cfDNA میں CNA کا اندازہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔انہوں نے نوٹ کیا کہ اعلی درجے کے کینسر کے مریضوں کو کنٹرول گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ CNI اسکور ہوتے ہیں، جو سیسٹیمیٹک کیموتھراپی اور امیونو تھراپی کے لیے مریضوں کے ردعمل کا اندازہ لگاتا ہے۔43 یہ نتائج بتاتے ہیں کہ مائع بایپسی کے نمونوں میں پائے جانے والے CNAs اعلی درجے کے کینسر کے مریضوں میں تشخیصی اشارے کے طور پر کام کر سکتے ہیں۔سیسٹیمیٹک تھراپی کے پس منظر پر ایچ سی سی۔
فی الحال، ctDNA کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیے جانے والے طریقوں کو ہدف شدہ اور غیر ہدف شدہ طریقوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔مختصراً، ٹارگٹڈ طریقے جیسے ڈیجیٹل پولیمریز چین ری ایکشن (dPCR)، BEAMing digital PCR، Amplification Refractory Mutation System-PCR، Capp-Seq اور Tam-Seq پہلے سے طے شدہ جینز کے لیے انتہائی حساس ہیں۔مکمل جینوم کی ترتیب اور NGS جیسے غیر ہدف کے طریقے پورے جینومک زمین کی تزئین کا ایک جامع نظارہ فراہم کرتے ہیں۔44 ٹارگٹ پینلز کے مقابلے میں، پوری جینوم کی ترتیب نہ صرف پوائنٹ میوٹیشنز اور انسرشنز کا پتہ لگا سکتی ہے، بلکہ دوبارہ ترتیب اور کاپی نمبر کی مختلف حالتوں کا بھی پتہ لگا سکتی ہے۔تشخیص، اور CTC اور cfDNA اچھے اشارے ہیں جو HCC کی متحرک نگرانی کے لیے استعمال کیے جا سکتے ہیں۔45 اس کے علاوہ، cfDNA تجزیہ HCC کا پتہ لگانے میں زیادہ مفید ہو سکتا ہے۔یان وغیرہ۔سے پتہ چلتا ہے کہ ایچ سی سی کے مریضوں کے پلازما میں سی ایف ڈی این اے جگر کے فبروسس اور صحت مند کنٹرول والے مریضوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھا۔AFP کے مقابلے میں، ctDNA سے ابتدائی HCC کے لیے ایک بہتر اسکریننگ مارکر ہونے کی امید ہے۔47 مائع بایپسیوں کے ممکنہ مطالعہ میں جنہوں نے آبادی کی آبادی میں cfDNA اور پروٹین کا تجربہ کیا، وہ HCC والے مریضوں کو HCC کے بغیر مریضوں سے ممتاز کرنے میں مؤثر ثابت ہوئے۔331 الٹراساؤنڈ نارمل اور AFP-منفی مریضوں کے فالو اپ میں، HCC کی تشخیص کے لیے cfDNA کی حساسیت اور خصوصیت بالترتیب 100% اور 94% تھی، لہذا cDNA غیر علامات والے HBsAg سیروپازیٹو افراد میں HCC کا پتہ لگا سکتا ہے۔Yeo48 مطالعہ میں، HCC والے مریضوں میں RASSF1A پروموٹر کے ہائپرمیتھیلیشن کی ایک اعلی تعدد (92.5%) پائی گئی۔اس کے علاوہ، Xu et al.بالترتیب 90.5% اور 83.3% کی مخصوصیت اور حساسیت کے ساتھ مخصوص میتھیلیشن مارکر کے پینل کا استعمال کرتے ہوئے HCC کی پیش گوئی کرنے کے لیے ایک تشخیصی ماڈل بنایا۔پینل ایچ سی سی کے مریضوں کو جگر کی دیگر بیماریوں کے مریضوں سے ممتاز کرنے کی اجازت دیتا ہے، جو کہ اے ایف پی سے بہتر ہے۔انہوں نے یہ بھی پایا کہ نارمل کنٹرول جن کا ٹیسٹ مثبت آیا ان میں HCC کے خطرے کے عوامل ہو سکتے ہیں، جیسے HBV انفیکشن یا الکحل کے استعمال کی تاریخ۔25 ہم یہ قیاس کرتے ہیں کہ HCC کے لیے زیادہ خطرے والے عوامل cfDNA کے ہائپر میتھیلیشن کو فروغ دے سکتے ہیں، جو پھر HCC کی ترقی میں حصہ ڈالتا ہے، اور اس طرح cfDNA ہائی رسک گروپس کی اسکریننگ میں کلیدی کردار ادا کر سکتا ہے۔Cai et al.ctDNA اتپریورتنوں کی مکمل رینج کا خلاصہ کریں اور مریضوں میں ٹیومر کے بوجھ کا اندازہ لگانے کے لیے ایک مضبوط حکمت عملی پیش کریں۔49 یہ حکمت عملی امیجنگ تبدیلی سے 4.6 ماہ پہلے ٹیومرجنیسیس کی نشاندہی کر سکتی ہے اور اس نے سیرم بائیو مارکر AFP، AFP-L3، اور PIVKA-II کے مقابلے میں بہتر تشخیصی کارکردگی دکھائی ہے۔سی ڈی این اے ٹیسٹنگ کی تشخیصی قدر اس وقت ظاہر کی گئی ہے جب تصویر کی تشخیص دستیاب نہیں ہے، لہذا سی ڈی این اے ٹیسٹنگ ہائی رسک گروپس میں ابتدائی ایچ سی سی کی تشخیص میں اہمیت کی حامل ہے۔حال ہی میں، سائنسدانوں نے 3204 طبی نمونوں اور cfDNA میں ملٹی ویریٹ جینیاتی تغیرات (5-hydroxymethylcytosine، 5′-motif، fragmentation، nucleosome ٹریس، HIFI سمیت) کے اشارے کا تجزیہ کرنے کے لیے NGS ٹیکنالوجی کا استعمال کیا۔تین آزاد ٹرین، ٹیسٹ، اور ٹیسٹ سیٹ کے ساتھ 50 دوبارہ تصدیق شدہ HIFI ماڈلز نے HCC اور غیر HCC آبادیوں کے درمیان HCC مخصوص ٹیسٹ اور ٹیسٹ سیٹس میں بالترتیب 95.79% اور 95.42% حساسیت کے ساتھ مستحکم اور قابل اعتماد امتیاز ظاہر کیا۔جنسیں بالترتیب 95.00% اور 97.83% تھیں۔ایچ سی سی کو سائروسیس سے ممتاز کرنے میں HIFI طریقہ کی تشخیصی قدر AFP سے زیادہ ہے۔اس کے علاوہ، سی ٹی ڈی این اے کو جراحی کے علاج میں بھی استعمال کیا جاتا ہے۔Atsushi et al.ایچ سی سی والے مریضوں میں سی ٹی ڈی این اے کے قبل از آپریشن سیرم کی سطح کا تعین کیا اور پتہ چلا کہ سی ڈی این اے مثبت گروپ میں تکرار کی شرح اور ایکسٹرا ہیپاٹک میٹاسٹیسیس کی شرح سی ڈی این اے منفی گروپ کے مقابلے میں نمایاں طور پر زیادہ تھی، اور سی ڈی این اے کی سطحیں نمایاں طور پر منسلک تھیں۔ٹیومر کی ترقی کے ساتھ.51 ایک انتہائی حساس بائیو مارکر ہونے کے ناطے، ctDNA HCC کی جہازوں پر حملہ کرنے کی صلاحیت کا اندازہ لگا سکتا ہے۔وانگ وغیرہ۔ایچ سی سی کے ساتھ 46 مریضوں کی مکمل جینوم کی ترتیب کو انجام دیا، اور ملٹی ویریٹیٹ تجزیہ سے پتہ چلتا ہے کہ مائکرو ویسلز میں حملے کے لیے سی ڈی این اے ویرینٹ کی ایلیل فریکوئنسی کی حد کی قیمت 0.83٪، حساسیت 89.7٪ اور مخصوصیت 80.0٪ ہے۔ریسیکٹ ایبل ایچ سی سی میں مائیکرو واسکولر یلغار کے لیے ایک آزاد خطرے کا عنصر، تجویز کرتا ہے کہ سی ڈی این اے بہترین علاج کی رہنمائی میں مدد کر سکتا ہے۔آخر میں، سی ٹی ڈی این اے مکمل طور پر ایچ سی سی کی موجودگی اور نشوونما میں ملوث ہے اور اسے ابتدائی اسکریننگ، جراحی کی تشخیص، اور بیماری کی نگرانی کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
CTCs بنیادی ٹیومر یا میٹاسٹیسیس سے اخذ کردہ مہلک خلیات ہیں جو خون کے دھارے میں میٹاسٹیزائز کرتے ہیں۔ٹیومر کے خلیے میٹرکس میٹالوپروٹیناسز (MMPs) کو خارج کرتے ہیں، جو تہہ خانے کی جھلی کو توڑ دیتے ہیں، جس سے ٹیومر کے خلیات براہ راست خون اور لمف کی نالیوں میں داخل ہوتے ہیں۔تاہم، زیادہ تر سی ٹی سیز انوکیز، مدافعتی حملے، یا قینچ کے دباؤ سے تیزی سے ختم ہو جاتے ہیں۔53 اپیٹیلیئل-میسینچیمل ٹرانزیشن (EMT) CTCs کو بنیادی ٹیومر ٹشو سے آسانی سے الگ تھلگ کرنے، کیپلیریوں پر حملہ کرنے، اور نمایاں طور پر بہتر بقا، میٹاسٹیسیس، حملہ آوری، اور منشیات کے خلاف مزاحمت حاصل کرنے کی اجازت دیتا ہے۔مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ پرائمری میٹاسٹیٹک ٹیومر میں ٹیومر کے مختلف خلیوں میں گہرا متفاوت ہے۔اس طرح، سی ٹی سی تجزیہ ٹیومر سیل ہیٹروجنیٹی کی ایک جامع تفہیم کا باعث بن سکتا ہے۔54
HCC سے وابستہ CTCs کے مخصوص مارکروں میں glypican-3 (GPC3)، asialoglycoprotein ریسیپٹر (ASGPR)، اپیتھیلیل سیل اڈیشن مالیکیول (EpCAM) اور اسٹیم سیل سے وابستہ مارکر جیسے CD44، CD90، 55 اور انٹر سیلولر (موٹر سیلولر) شامل ہیں۔) .56 جی پی سی 3 مارکر ایک سیل میمبرین اینکرڈ پروٹین ہے جو طبی طور پر پیتھولوجیکل تجزیہ اور ایچ سی سی کی خصوصیات کے لیے استعمال ہوتا ہے۔57 جی پی سی 3 کا اظہار ایچ سی سی ٹیومر خلیوں میں زیادہ عام ہے جس میں درمیانی اور کم تفریق ہے اور ایکسٹرا ہیپیٹک ہجرت کو فروغ دیتا ہے۔اس کے علاوہ، GPC3+ CTCs کی موجودگی میٹاسٹیٹک HCC کی نشاندہی کرتی ہے۔58 اے ایس جی پی آر ایک ٹرانس میبرن پروٹین ہے جس کا اظہار صرف ہیپاٹوسائٹس کی سطح پر ہوتا ہے اور اس کا اظہار اچھی طرح سے مختلف ایچ سی سی میں ہوتا ہے۔EpCAM CTCs کو حاصل کرنے کے لئے سب سے زیادہ استعمال شدہ جھلی سے وابستہ پروٹینوں میں سے ایک ہے۔EpCAM کی شناخت سٹیم سیل کی خصوصیات کے ساتھ HCC خلیات کے سطحی مارکر کے طور پر کی گئی ہے، 59 جو HCC کی مختلف کلینکوپیتھولوجیکل خصوصیات، جیسے عروقی حملہ، تشخیص شدہ AFP کی سطح، اور بارسلونا ہسپتال (BCLC) میں جگر کے کینسر کے اعلی درجے کے مرحلے سے تعلق رکھتا ہے۔60 CTC EMT فینوٹائپ انتہائی میٹاسٹیٹک ہے۔CTC میں 54 EMT عمل HCC میٹاسٹیسیس کو فروغ دیتے ہیں۔ایچ سی سی کے مریضوں کے جگر سے ماخوذ CTCs میں EMT مارکر جیسے ویمنٹن، ٹوئسٹ، ای باکس زنک فنگر بائنڈنگ (ZEB) 1، ZEB2، snail، slug، اور E-cadherin کے اظہار کا مطالعہ کیا گیا ہے۔58 چینگ [61] کے ذریعہ تیار کردہ CanPatrol™ سسٹم نے CTCs کو تین فینوٹائپک ذیلی گروپوں میں درجہ بندی کیا ہے جو بنیادی طور پر ظاہر کردہ مارکروں کی بنیاد پر ہیں: اپیٹیلیل فینوٹائپ (EpCAM، CK8/18/19)، mesenchymal فینوٹائپ (vimentin، coiled)، اور مخلوط۔176 مریضوں میں، کل CTC HCC کو سومی جگر کی بیماری سے فرق کرنے میں AFP سے برتر تھا۔کل CTC، AFP، اور مشترکہ کل CTC اور AFP کے لیے AUC کی قدریں 0.774 (95% CI، 0.704–0.834)، 0.669 (95% CI، 0.587–0.750)، اور 0.821 (95% CI، 0.86–0.86) تھیں۔ )۔)، بالترتیب۔EMT کی بنیاد پر CTC کی درجہ بندی HCC کی تشخیص، ابتدائی تکرار، میٹاسٹیسیس، اور مختصر مجموعی وقت کی پیشین گوئی کر سکتی ہے۔
فی الحال، CSCs کا پتہ لگانے کے طریقوں میں جسمانی طریقے اور حیاتیاتی طریقے شامل ہیں۔جسمانی طریقے، جنہیں اکثر بایو فزیکل خصوصیات کی بنیاد پر افزودگی کہا جاتا ہے، بنیادی طور پر CSC کی جسمانی خصوصیات پر منحصر ہے، جیسے کہ سائز، کثافت، چارج، نقل و حرکت اور خرابی کی صلاحیت۔طبعی خصوصیات کے لحاظ سے، مختلف طریقے ہیں جیسے فلٹریشن پر مبنی نظام، ڈائی الیکٹروفورسس وغیرہ۔ مؤخر الذکر، جسے امیونوافینٹی پر مبنی افزودگی بھی کہا جاتا ہے، بنیادی طور پر اینٹیجن اینٹی باڈی بائنڈنگ پر مبنی ہے کیونکہ یہ طریقہ ٹیومر کے مخصوص بائیو مارکر کے خلاف اینٹی باڈیز کا استعمال کرتا ہے۔ جیسے EpCAM، ASGPR، انسانی ایپیڈرمل گروتھ فیکٹر ریسیپٹر 2 (HER2)، پروسٹیٹ مخصوص اینٹیجن (PSA)، ہیومن پینسیٹوکیریٹن (P-CK) اور کارباموائل فاسفیٹ سنتھیس 1 (CPS1)۔62 ایک اور قسم، جسے نو افزودگی کا طریقہ کہا جاتا ہے، سی ٹی سی کو لیوکوائٹس سے الگ کرنے کے لیے فلو سائٹومیٹری کا استعمال کرتا ہے جو کہ زیادہ جوہری سے سائٹوپلاسمک تناسب اور سائز کی بنیاد پر ہوتا ہے۔فی الحال، CTCs کی کھوج کے لیے صرف FDA سے منظور شدہ ٹیسٹ Cell-Search™ سسٹم ہے، جو EpCAM سیل سطح کے مارکر کا استعمال کرتا ہے۔ تاہم، مشترکہ مارکر پر مبنی CTC کا پتہ لگانے سے مثبتیت کی شرح میں اضافہ ہو سکتا ہے۔ 54 ASGPR اور CPS1 کے خلاف اینٹی باڈیز کے مرکب نے HCC کے مریضوں میں CTC کا پتہ لگانے کی شرح 91% حاصل کی۔ 63 Zhang et al نے ASGPR کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ CTC-Chip استعمال کیا۔ -CK اور CPS1، اور HCC کے مریضوں کو جگر کی سومی بیماری یا غیر HCC کینسر والے مریضوں سے 100%.64 کی شرح سے ممتاز کیا گیا Wang کے ایک مطالعہ نے HCC کے 42 مریضوں میں سے 60% میں EpCAM+ CTCs کا پتہ لگایا اور دونوں کے درمیان مثبت تعلق پایا۔ شرح اور TNM مرحلے کے ساتھ CTCs کی تعداد۔ 65 Guo et al نے پایا کہ 125/171 (73%) مریضوں میں CTC سے ماخوذ PCR سکور بلند ہوا جن کی AFP کی سطح <20 ng/mL تھی جس کی حساسیت 72.5% تھی اور a 95.0% کی مخصوصیت، AFP کے لیے 57.0% اور 90.0% کے مقابلے میں ایک کٹ آف 20 ng/mL پر۔ 66 AFP اور CTCs کا امتزاج HCC کا پتہ لگانے میں بہتری لا سکتا ہے۔ HCC کے لیے زیادہ خطرے میں۔ تاہم، مشترکہ مارکر پر مبنی CTC کا پتہ لگانے سے مثبتیت کی شرح میں اضافہ ہو سکتا ہے۔ 54 ASGPR اور CPS1 کے خلاف اینٹی باڈیز کے مرکب نے HCC کے مریضوں میں CTC کا پتہ لگانے کی شرح 91% حاصل کی۔ 63 Zhang et al نے ASGPR کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ CTC-Chip استعمال کیا۔ -CK اور CPS1، اور HCC کے مریضوں کو جگر کی سومی بیماری یا غیر HCC کینسر والے مریضوں سے 100%.64 کی شرح سے ممتاز کیا گیا Wang کے ایک مطالعہ نے HCC کے 42 مریضوں میں سے 60% میں EpCAM+ CTCs کا پتہ لگایا اور دونوں کے درمیان مثبت تعلق پایا۔ شرح اور TNM مرحلے کے ساتھ CTCs کی تعداد۔ 65 Guo et al نے پایا کہ 125/171 (73%) مریضوں میں CTC سے ماخوذ PCR سکور بلند ہوا جن کی AFP کی سطح <20 ng/mL تھی جس کی حساسیت 72.5% تھی اور a 95.0% کی مخصوصیت، AFP کے لیے 57.0% اور 90.0% کے مقابلے میں ایک کٹ آف 20 ng/mL پر۔ 66 AFP اور CTCs کا امتزاج HCC کا پتہ لگانے میں بہتری لا سکتا ہے۔ HCC کے لیے زیادہ خطرہ۔تاہم، CTCs کی مارکر پر مبنی مشترکہ پتہ لگانے سے مثبت نتائج کے فیصد میں اضافہ ہو سکتا ہے۔ 54 اینٹی ASGPR اور CPS1 اینٹی باڈیز کے مرکب نے HCC کے مریضوں میں CTC کا پتہ لگانے کی شرح 91% حاصل کی۔63 Zhang et al.ASGPR، P-CK اور CPS1 کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ CTC-Chip کا استعمال کیا، اور HCC والے مریضوں کو 100% کی شرح سے جگر کی سومی بیماری یا غیر HCC والے مریضوں سے ممتاز کیا۔частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге گرپ TNM مرحلے کے ساتھ CTCs کی تعدد اور تعداد۔ 65 Guo et al نے پایا کہ CTCs سے اخذ کردہ PCR 125/171 (73%) مریضوں میں بلند ہوا جن میں AFP کی سطح <20 ng/mL تھی جس کی حساسیت 72.5% تھی اور ایک خاصیت 20 ng/mL کے کٹ آف لیول پر AFP کے لیے 57.0% اور 90.0% کے مقابلے میں 95.0%۔ AFP اور CTCs کا امتزاج HCC کی کھوج کو بہتر بنا سکتا ہے۔ 45 CTCs کو ابتدائی اسکریننگ میں AFP کے مقابلے میں فائدہ سمجھا جاتا ہے۔ گروپسHCC کے اعلی خطرے کے ساتھ۔تاہم، CTCs کی مارکر پر مبنی مشترکہ پتہ لگانے سے مثبت نتائج کے فیصد میں اضافہ ہو سکتا ہے۔54 اینٹی اے ایس جی پی آر اور سی پی ایس 1 اینٹی باڈیز کے مرکب نے ایچ سی سی کے مریضوں میں 91٪ CTC کا پتہ لگانے کی شرح حاصل کی۔63 Zhang et al.ASGPR، P-CK اور CPS1 کے خلاف اینٹی باڈیز کے ساتھ CTC چپس کا استعمال کیا اور HCC والے مریضوں کو سومی جگر کی بیماری اور غیر HCC کے ساتھ 100% ممتاز کیا۔64 وانگ کے مطالعہ نے HCC کے 42 مریضوں میں 60% EpCAM+ CTCs کی نشاندہی کی اور TNM مرحلے پر واقعات اور CTCs کی تعداد کے درمیان ایک اہم تعلق پایا۔ 65 Guo 等人发现，在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中，CTC 衍生的PCR 评分升高，人分升高，丄分升高% 评分升高，敏渄分升高%评分升高评分升高%评分升高，敏渉%值为20 ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%۔ 65 گو 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 این جی/ایم ایل 的 125/171 (73 ٪) 名 患者 ， ， ， CTC 衍生 PCR 评分 敏感性 敏感性 为 为 为 为 72.5 ٪ ， 95.0 ٪ ， ， ， 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 ， ，截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 为 为 为 20ng/ml 时 特异性 为 为 为 为 为 为 为 57.0 ٪ 和 90.0 ٪。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 ng/ml. پتہ چلا کہ 125/171 (73%) مریضوں میں AFP کی سطح <20 ng/mL کے ساتھ، CTC سے ماخوذ PCR قدریں 72.5% کی حساسیت اور 95.0% کی مخصوصیت کے ساتھ بلند ہوئیں، جب کہ AFP کٹ آف مخصوصیت پر تھا۔ 20 ng/mL تھا۔ملی لیٹر 57.0% اور 90.0% تھا۔66 ORP اور CTC کا امتزاج HCC کی کھوج کو بہتر بناتا ہے۔45 CTCs کو اعلی خطرے والی HCC آبادیوں کی ابتدائی اسکریننگ میں AFP سے برتر سمجھا جاتا ہے۔اس طرح، CTC-مثبت اور ہائی رسک HCC گروپوں کے لیے، CTC ٹیسٹنگ کو معمول کے مطابق الٹراساؤنڈ اور AFP کا پتہ لگانے کے ساتھ ملایا جانا چاہیے۔تاہم، CTCs کو ٹیومر میٹاسٹیسیس اور تکرار کا اہم پیش گو سمجھا جاتا ہے، اور CTCs کا پتہ لگانے کی آزادانہ طور پر تشخیصی ٹول کے طور پر سفارش نہیں کی جاتی ہے۔62 لہذا، CTC دوسرے موجودہ استعمال شدہ مارکر کے مقابلے میں ایک بہتر پیشن گوئی کرنے والے بائیو مارکر کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ Zhou et al نے پایا کہ EpCAM+ CTCs اور ریگولیٹری ٹی سیلز کی بلند تعداد والے مریضوں میں HCC کی تکرار ہونے کا زیادہ خطرہ ظاہر ہوتا ہے، CTCs کی کم تعداد والے مریضوں کے مقابلے میں، تکرار کا تناسب 66.7% بمقابلہ 10.3% (P <0.001) 67۔ اسی طرح کی ایک تحقیق Zhong et al.68 کی طرف سے رپورٹ کی گئی تھی اس کے علاوہ، Qi نے پایا کہ ایچ سی سی کے 112 مریضوں میں سے 101 (90.81٪)، بشمول ابتدائی مرحلے کی بیماری والے، سی ٹی سی کے لیے مثبت تھے اور بہت چھوٹے ایچ سی سی نوڈولز کا پتہ چلا 3 کے بعد۔ فالو اپ کے 5 ماہ تک۔ Zhou et al نے پایا کہ EpCAM+ CTCs اور ریگولیٹری ٹی سیلز کی بلند تعداد والے مریضوں میں CTCs کی کم تعداد والے مریضوں کی نسبت HCC کی تکرار ہونے کا زیادہ خطرہ ظاہر ہوتا ہے، جس کا تکرار تناسب 66.7% بمقابلہ 10.3% (P <0.001) 67 A ہے۔ اسی طرح کے مطالعے کی اطلاع Zhong et al.68 کے ذریعہ کی گئی ہے۔ اس کے علاوہ، Qi نے پایا کہ ایچ سی سی کے 112 مریضوں میں سے 101 (90.81٪) جن میں ابتدائی مرحلے کی بیماری بھی شامل ہے، سی ٹی سی کے لیے مثبت تھے اور یہ کہ بہت چھوٹے ایچ سی سی نوڈولس کا پتہ چلا 3 سے فالو اپ کے 5 ماہ۔ Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al نے پایا کہ بلند EpCAM+ CTCs اور ریگولیٹری ٹی سیل والے مریضوں میں HCC کی تکرار کا خطرہ کم CTC والے مریضوں کے مقابلے میں ہوتا ہے، جس کی تکرار کی شرح 66.7% بمقابلہ 10.3% (P <0.001 )67 ہے۔اسی طرح کا مطالعہ ژونگ ایٹ ال نے کیا تھا۔68. اس کے علاوہ، Qi نے پایا کہ HCC والے 112 میں سے 101 مریضوں (90.81%) میں، جن میں ابتدائی بیماری والے افراد بھی شامل ہیں، CTCs تھے، اور یہ کہ بہت چھوٹے HCC نوڈولز کا 3 سے 5 ماہ کے فالو اپ کے بعد پتہ چلا۔ Zhou 等 发现 发现 ， 与 CTC 数量 较 少 的 患者 ， ， Epcam+ CTC 和 调节性 T 细胞 数量 升高 的 发生 HCC 复发 风险 风险 更 高 ， 分别 分别 66.7 ٪ 和 10.3 ٪ (P <0.001)。 Zhou 等 发现 发现 与 与 与 ctc 数量 的 的 患者 相比 ， ， epcam+ ctc 和 t 细胞 的 的 患者 患者 发生 发生 Hcc 复发 风险 复发率 分别 分别 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p <0.001)... Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). چاؤ وغیرہ۔پتہ چلا کہ بلند EpCAM+ CTCs اور ریگولیٹری ٹی سیل والے مریضوں میں HCC کے دوبارہ ہونے کا خطرہ کم CTC والے مریضوں کے مقابلے میں بالترتیب 66.7% اور 10.3% کی تکرار کی شرح کے ساتھ ہوتا ہے (P <0.001)۔اسی طرح کے ایک مطالعہ کی اطلاع Zhong et al نے دی تھی۔68 اس کے علاوہ، Qi نے پایا کہ HCC کے 112 مریضوں میں سے 101 (90.81%)، بشمول ابتدائی بیماری کے مریض، کے مثبت CTC نتائج تھے اور 3 دوروں کے بعد بہت چھوٹے HCC نوڈول پائے گئے۔5 ماہ تک کا مشاہدہ۔انہوں نے دائمی HBV انفیکشن والے 12 مریضوں میں CTCs بھی پایا اور 2 CTC- مثبت مریضوں میں 5 ماہ کے اندر چھوٹے HCC ٹیومر پائے۔69 اس طرح، CTCs کا استعمال HCC، 70 کی پیشن گوئی کرنے کے لیے کیا جا سکتا ہے لیکن وہ پیش گوئی کرنے والے بائیو مارکر کے طور پر زیادہ معمول کے مطابق استعمال کیے جا سکتے ہیں۔
cfDNA کی طرح، cfRNA مختلف نظاموں کے ذریعے خون کے دھارے میں جاری ہوتا ہے۔پردیی خون میں یہ مالیکیول اصل کے کینسر والے ٹشو کی نمائندگی کرتے ہیں۔غیر جارحانہ طریقوں سے پتہ چلنے والے مارکروں کے مقابلے میں، cfRNAs زیادہ متحرک طور پر ریگولیٹڈ، ٹشو مخصوص، اور ایکسٹرا سیلولر ماحول میں بکثرت ہوتے ہیں۔بہت سے مطالعات میں HCC میں 71 miRNAs (miRNAs) کی اہمیت اور تشخیصی قدر کی اطلاع دی گئی ہے۔miRNAs اینڈوجینس نان کوڈنگ RNAs (ncRNAs) ہیں جو ٹارگٹ میسنجر RNAs (mRNAs) کے ترجمہ کو روک کر مختلف سالماتی حیاتیاتی سرگرمیوں کو منظم کرتے ہیں۔miRNAs exosomes میں سمیٹے ہوئے apoptotic جسموں میں واقع ہوتے ہیں، لیکن وہ پردیی خون میں سیرم پروٹینز اور لپڈس کے ساتھ بھی مضبوطی سے جڑ سکتے ہیں اور HCC کا اندازہ کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔مائکرو آر این اے جگر کی تخلیق نو، لپڈ میٹابولزم، اپوپٹوسس، سوزش اور ایچ سی سی کی نشوونما میں ملوث ہیں۔72 Oncogenic miRNAs جیسے miR-21، miR-155 اور miR-221 HCC میں مشہور ہیں۔خاص طور پر، miR-21 ایکسٹرا سیلولر میٹرکس اور فائبروسس میں کولیجن کی ترکیب میں کلیدی کردار ادا کرتا ہے اور hematopoietic اسٹیم سیلز کو چالو کرکے ہیپاٹو کارسینوجنیسیس کو فروغ دیتا ہے۔HCC میں ٹیومر دبانے والے 72,73 miRNAs میں miRNA-122، miRNA-29، Let-7 فیملی، اور miRNA-15 فیملی شامل ہیں۔Let-7 فیملی بہت سے ٹیومر دبانے والے miRNAs پر مشتمل ہے جو RAS فیملی کو نشانہ بناتے ہیں۔miR-15 فیملی میں miR-15a، miR-15b، miR-16، miR-195، اور miR-497 شامل ہیں، جن میں کچھ mRNAs کے لیے تکمیلی سلسلے ہوتے ہیں۔اس کے علاوہ، طویل نان کوڈنگ RNAs (lncRNAs) اور سرکلر RNAs (cirRNAs) بھی HCC کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے اہم ہیں۔lncRNAs ncRNAs کے وسیع ترین طبقے کی نمائندگی کرتے ہیں، بشمول mRNA جیسے ncRNAs، اور بہت سی انسانی بیماریوں کے روگجنن میں شامل ہیں۔LncRNAs جگر کے مائیکرو ماحولیات اور جگر کی دائمی بیماری میں ریگولیٹری کردار ادا کرتے ہیں۔74 CircRNAs بھی ncRNAs کی ایک کلاس ہیں جن میں جین کے اظہار کے ضابطے میں متعدد افعال ہوتے ہیں۔حال ہی میں، circRNAs کو HCC کے لیے تشخیصی ٹولز کے طور پر سمجھا جاتا ہے۔
گردش کرنے والے مفت آر این اے میں قابل ذکر استحکام ہے، بشمول درجہ حرارت، پی ایچ، اور آر نیس کے خلاف مزاحمت، جو معیاری آر این اے پیوریفیکیشن طریقوں کا استعمال کرتے ہوئے پردیی خون سے ایف این آر این اے کو الگ تھلگ کرنے کو کم تکلیف دہ بناتا ہے۔سب سے زیادہ استعمال شدہ طریقوں میں NGS، microarray اور RT-qPCR شامل ہیں۔این جی ایس مائیکرو آر این اے کو پورے جینوم میں ماپا جانے کی اجازت دیتا ہے۔تاہم، یہ طریقہ مہنگا ہے اور تجزیہ معیاری نہیں ہے.اس کے برعکس، RT-qPCR سستا ہے، نیوکلک ایسڈ کو تیزی سے بڑھاتا ہے، اور بہت سے فوائد پیش کرتا ہے جیسے کہ زیادہ حساسیت، زیادہ درستگی، وسیع تر متحرک رینج، اور کم نمونوں کی ضرورت ہوتی ہے۔مائیکرو رے ایک اور طریقہ ہے جو miRNA کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے جو کہ تکمیلی DNA تحقیقات کے ساتھ ہدف miRNAs کی حساس اور مخصوص ہائبرڈائزیشن پر مبنی ہے، 75 لیکن مائیکرو رے ڈیٹا کے تجزیہ میں وقت لگتا ہے۔
گردش کرنے والے miR-122 اور Let-7 کو زیادہ خطرہ والے گروپوں میں ابتدائی مرحلے میں HCC کی تشخیص کے لیے ممکنہ طور پر مفید بتایا گیا ہے، HBV سے وابستہ premalignant nodules اور ابتدائی مرحلے HCC والے مریضوں میں مارکر۔76 Cai et al.پتہ چلا کہ Let-7 خاندان کے افراد (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126, اور miR-199a/b) دائمی بیماری کے خطرے میں ہیں ہیپاٹائٹس کے مریضوں میں ایچ سی سی۔Let-7 فیملی دائمی ہیپاٹائٹس سی سے وابستہ اعلی خطرے والے گروپوں میں ایچ سی سی کی نشوونما کی پیشن گوئی کرنے کے لیے ایک موثر سروگیٹ بائیو مارکر کے طور پر کام کر سکتی ہے۔ 77 miR-122 جگر کی سروسس کے مریضوں میں ابتدائی HCC کا پتہ لگانے میں اعلیٰ تشخیصی درستگی رکھتا ہے۔78 سیرم گردش کرنے والے MiR-107 کا بھی HCC، 79 کے ابتدائی مراحل میں جائزہ لیا گیا ہے اور اس نے زیادہ خطرہ والی آبادی میں اچھی صلاحیت ظاہر کی ہے۔Zhou et al نے اطلاع دی کہ miRNAs کا ایک پینل (miR-122، miR-192، miR-21، miR-223، miR-26a، miR-27a اور miR-801) HCC کو دائمی ہیپاٹائٹس بی (CHB) اور سروسس سے مختلف کر سکتا ہے۔ حساسیت بالترتیب 79.1% اور 75%، اور مخصوصیت 76.4% اور 91.1% تھی۔80 HBV سے متعلقہ HCC میں، ہم نے محسوس کیا کہ miR150 کی سطح HCC کے بغیر دائمی HBV مریضوں کے مقابلے میں نمایاں طور پر کم ہوئی تھی (حساسیت 79.1%، مخصوصیت 76.5%)۔صحت مند کنٹرول کے مقابلے HCC میں -224 کو بلند کیا گیا تھا، اور ذیلی گروپ کے تجزیوں نے HBV سے وابستہ HCC والے مریضوں میں اعلی سطح کو ظاہر کیا۔ہیپاٹائٹس بی سے وابستہ سروسس اور ایچ سی سی کے مریضوں نے ایک siRNA درجہ بندی کی نشاندہی کی جس میں سات مختلف قسم کے siRNAs پر مشتمل ہے جو مختلف کنٹرولوں میں HCC کا پتہ لگا سکتا ہے۔ابتدائی اسکریننگ میں AUC کی حد AFP رضاکاروں سے بہتر ہے۔انہوں نے پایا کہ چار miRNAs (miR-1972، miR-193a-5p، miR-214-3p، اور miR-365a-3p) HCC والے مریضوں کو HCC کے بغیر مریضوں سے ممتاز کر سکتے ہیں۔پانچ اوور ایکسپریسنگ miRNAs (miR-122-5p، miR-125b-5p، miR-885-5p، miR-100-5p، اور miR-148a-3p) کو HCC، سروسس، اور CHB بائیو مارکر میں ممکنہ HBV انفیکشن سمجھا جاتا ہے، خاص طور پر miR-34a-5p جگر کی سروسس، 85 کے لیے بائیو مارکر ہو سکتا ہے اور زیادہ خطرہ والی آبادی میں ایچ سی سی کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے ممکنہ بائیو مارکر ہو سکتا ہے۔HCC میں سب سے زیادہ مطالعہ کیا گیا lncRNA جگر کے کینسر (HULC) میں انتہائی فعال ہے۔دیگر مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ ایچ سی سی کے مریضوں میں گردش کرنے والی ایچ یو ایل سی کو ایک تشخیصی مارکر کے طور پر استعمال کیا جا سکتا ہے کیونکہ یہ lncRNA صحت مند افراد کے مقابلے ایچ سی سی کے مریضوں میں بہت زیادہ اپ گریڈ ہوتا ہے۔71,86 دیگر lnRNAs میں، LINC00152 کو اس کی اعلی AUC، حساسیت اور مخصوصیت کی وجہ سے بہترین تشخیصی lncRNA سمجھا جاتا ہے۔86 ایک مطالعہ میں، LINC00152 کا پردیی خون کا اظہار آہستہ آہستہ عام صحت مند کنٹرول سے CHB اور سروسس کے مریضوں تک بڑھتا گیا، اور آخر میں HCC میں سب سے زیادہ تھا۔HCC والے مریضوں کے پلازما میں circSMARCA5 کے اظہار کے مطالعے نے HCC میں ہیپاٹائٹس سے لے کر سروسس اور precancerous گھاووں تک کے اظہار میں ایک ترقی پسند کمی ظاہر کی ہے۔ROC منحنی خطوط کے 87 تجزیے نے ہیپاٹائٹس یا جگر کے سرروسس کے مریضوں کو HCC والے مریضوں سے ممتاز کرنے میں ان سرک این اے کی صلاحیت کی تصدیق کی، خاص طور پر وہ لوگ جن کی AFP کی سطح 200 ng/mL سے کم ہے۔اس کے علاوہ، Zhu نے HBV سے وابستہ HCC مریضوں کے پلازما کے نمونوں میں 13,617 سائیکلک RNAs کا تجزیہ کیا اور اس بات کی تصدیق کی کہ HCC اور HBV سے وابستہ سائروسیس میں 6 سائیکلک RNAs کا مختلف انداز میں اظہار کیا گیا، یہ تجویز کیا گیا کہ cRNAs فائدہ مند ہو سکتے ہیں۔اعلی خطرے والے گروپوں کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے مارکر جیسے جگر کی بیماری سے وابستہ افراد، سکلیروسیس کے مریض۔88
Exosomes 40-160 nm قطر میں جھلی کے vesicles ہیں؛متعدد انٹرا سیلولر ویسکلز سیل جھلی کے ساتھ مل جاتے ہیں اور ایکسٹرا سیلولر میٹرکس میں جاری ہوتے ہیں۔ان میں بہت سے فعال اجزاء ہوتے ہیں، جن میں لپڈ، پروٹین، RNA اور DNA شامل ہیں، اور HCC اور غیر HCC دونوں خلیوں کے درمیان رابطے میں کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔89,90 Exosomes hepatocyte fibroblasts اور stellate خلیات، مدافعتی خلیات، عام ہیپاٹوسائٹس، اور HCC خلیات کو چالو کرکے HCC کی ترقی کو منظم کرتے ہیں۔91 ٹیومر مائیکرو ماحولیات میں، ٹیومر کے خلیے بڑی تعداد میں ایکزوزوم تیار کرتے ہیں جو کینسر کے خلیات سے ناپختہ خلیوں تک لے جاتے ہیں، جو بدلے میں آنکوجینیسیس، انحطاط اور سیلولر سگنلنگ میں شامل ہوتے ہیں۔92 مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ exosomes پیتھولوجیکل عمل کے دوران oncogenes کو عام خلیوں میں منتقل کر سکتے ہیں، جو کہ ٹیومر کے حملے اور میٹاسٹیسیس کے طریقہ کار میں سے ایک ہو سکتا ہے۔93 کینسر کے بڑھنے میں exosomes کا کردار متحرک اور کینسر کی قسم کے لیے مخصوص ہو سکتا ہے، 89 Exosomes کو ملحقہ یا دور کے خلیوں کے ذریعے اندرونی بنایا جا سکتا ہے تاکہ وصول کنندہ کے خلیات میں متعدد ہدف والے جینوں کو منظم کیا جا سکے جو انٹر سیلولر کمیونیکیشن آئنوں اور سیلولر مائیکرو ماحولیات کے تعاملات میں شامل ہو سکتے ہیں۔ سیلولر سگنلنگ اور میٹابولزم میں ثالثی کریں۔94 exosome cargo molecules کی خصوصیات اور متحرک تبدیلیاں براہ راست والدین کے ٹیومر سیلز کی خصوصیات اور متحرک تبدیلیوں کی عکاسی کرتی ہیں، 95 جو کینسر کی تشخیص اور تشخیص میں exosomes کے استعمال کے ساتھ ساتھ انسداد کینسر تھراپی کے لیے انفرادی ردعمل کی پیشن گوئی کے لیے بھی بنیاد ہے۔ ..96
Exosomes کو الگ تھلگ کرنے اور ان کا تجزیہ کرنے کے روایتی لیبارٹری کے طریقے پیچیدہ، ملٹی سٹیپ اور وقت طلب ہیں، جن میں الٹرا سینٹرفیوگریشن، فلٹریشن، سائز ایکسکلوزن کرومیٹوگرافی، امیونوافینٹی پیوریفیکیشن، ویسٹرن بلوٹنگ، انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA)، Plyanasis، Plyanasis شامل ہیں۔مائیکرو/نینو ٹکنالوجی کا استعمال کرتے ہوئے چھوٹے نظام اور لیب آن-اے-چپ پلیٹ فارمز کو وسیع پیمانے پر تیار کیا جا رہا ہے تاکہ exosomes کی الگ تھلگ حالت میں تیز، آسان ہو۔نینو پارٹیکل ٹریکنگ تجزیہ (NTA) exosomes کے سائز اور ارتکاز کو نمایاں کرنے کے لیے ایک وسیع پیمانے پر استعمال شدہ طریقہ ہے، جس میں میگنیٹک نینو پارٹیکلز اور پولی ہائیڈروکسیالکانوایٹس جیسے طریقے شامل ہیں۔مائیکرو فلائیڈک اور الیکٹرو کیمیکل طریقے بھی تیز رفتاری سے زیادہ پیداوار میں exosomes کا پتہ لگا سکتے ہیں۔
Exosomal پروٹین HCC کی تشخیص کے لیے اہم مارکر ہیں۔Arbelaiz مطالعہ میں، 98 RasGAP SH3 بائنڈنگ پروٹین (G3BP) اور پولیمرک امیونوگلوبلین ریسیپٹر (PIGR) کی سطح HCC سے حاصل شدہ exosomes میں نمایاں طور پر بلند ہوئی، اور دونوں پروٹینوں کی مشترکہ افادیت AFP سے بہتر تھی۔لوہے کا اوورلوڈ ایک اہم عنصر ہے جو ایچ سی سی کی ترقی میں معاون ہے۔تسینگ نے اطلاع دی کہ ہیپسیڈن ایچ سی سی کے خلاف مزاحمت میں کلیدی کردار ادا کر سکتا ہے۔HCC کے مریضوں کے سیرا سے اخذ کردہ 99 Exosomes میں ان کے صحت مند ہم منصبوں کے مقابلے میں hepcidin mRNA کی مختلف قسموں کی کاپی کی تعداد نمایاں طور پر زیادہ تھی، جو تجویز کرتی ہے کہ ہیپسیڈن HCC کے لیے ایک نیا تشخیصی بائیو مارکر ہو سکتا ہے۔14-3-3ζ پروٹین 100 HCC کے ذریعہ تیار کردہ exosomes میں T سیل ایکٹیویشن، پھیلاؤ، اور تفریق کو کم کر سکتا ہے اور T سیل کی تبدیلی کو ریگولیٹری T سیلز میں آمادہ کر سکتا ہے، جس کے نتیجے میں T سیل کی کمی واقع ہوتی ہے۔101 اس کی حمایت مدافعتی نگرانی سے ٹیومر کی چوری کی تحقیقات کرنے والے کئی مطالعات سے ہوتی ہے، 102 جو HCC tumorigenesis میں حصہ ڈال سکتے ہیں۔
پلازما یا سیرم میں ecRNA کی موجودگی کے علاوہ، RNA سے افزودہ exosomes کو ٹیومر کی ابتدائی اسکریننگ میں غیر حملہ آور ریئل ٹائم سٹیجنگ اور ٹیومر کے ارتقاء اور تھراپی کے ردعمل کا تعین کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔HCC گروپ میں خون کے سیرم میں exosomal miRNA-21 کی سطح CHB گروپ کے مقابلے میں 2.21 گنا زیادہ تھی، اور HCC گروپ میں یہ صحت مند آبادی کے مقابلے میں 5.57 گنا زیادہ تھی۔وانگ کے مطالعے میں، 0.83 (95% CI 0.74–0.93) اور 0.94 (95% CI 0.88–1.00) کی AUC قدروں والے سیرروٹک مریضوں کے مقابلے میں exosomes نے HCC میں نمایاں اضافہ کیا۔104 حاصل کردہ اعداد و شمار نے آنکوجینیسیس اور HCC کی ترقی کے ضابطے میں مخصوص exosomal کارگو مالیکیولز کی شمولیت کو واضح کیا۔miR-221، miR-103، miR-181c، miR-181a، miR-93 اور miR-26a کا 105 سیرم ایکسپریشن مستقل ہے۔اور میٹاسٹیسیس، اور miR21 کی سطح HCC کے مریضوں میں صحت مند کنٹرول کے مقابلے میں بہت زیادہ تھی اور CHB کے مریضوں میں بھی۔ 102 LncRNA کی HCC میں ممکنہ تشخیصی قدر تھی۔مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ HCC مریضوں کے سیرا سے اخذ کردہ exosomes میں LINC00161، LINC000635، اور lncRNA کی نمایاں طور پر اعلی سطح ہوتی ہے جو HCC کے بغیر مریضوں کی نسبت گروتھ فیکٹر-β کو تبدیل کرکے چالو ہوتی ہے، اور یہ lncRNAs مضبوطی سے TNM مرحلے اور ٹیومر کے حجم سے وابستہ ہیں۔110 Conigliaro et al.CD90+ exosomes lncRNAH19 کی اعلی سطح کا اظہار کرتے ہوئے پائے گئے، جس نے ویسکولر اینڈوتھیلیل گروتھ فیکٹر (VEGF) کی رہائی اور VEGF-R1 ریسیپٹر کی پیداوار میں نمایاں اضافہ کیا، اس طرح انجیوجینیسیس کو متحرک کیا۔93 CircRNAs ایک اور قسم کے exosomal ncRNAs ہیں - جس کا اظہار تمام پرجاتیوں میں نچلی لیکن مستحکم سطح پر ہوتا ہے، circRNAs سیل کی قسم، ٹشو کی قسم، ترقی کے مرحلے، اور ریگولیٹری سرگرمی کے لیے بھی خصوصیت ظاہر کرتے ہیں۔111 سرک این اے ابتدائی اور کم سے کم ناگوار کینسر کے لیے تشخیصی بائیو مارکر ہیں۔112 حالیہ کلینیکل ٹرائلز نے دکھایا ہے کہ HCC کی پیشن گوئی کرنے میں انفرادی miRNAs کی خصوصیت مثالی نہیں ہے۔لہذا، ایک سے زیادہ اسسیس (جیسے miR-122 اور miR-48a AFP کے ساتھ مل کر) کا استعمال کرتے ہوئے پیچیدہ پتہ لگانے سے ابتدائی HCC کی شناخت اور HCC کی سروسس سے تفریق بہتر ہو سکتی ہے۔100
CHB اور جگر کی سروسس کے مریض ایچ سی سی کی نشوونما کے لیے سب سے عام ہائی رسک گروپ ہیں۔زیادہ خطرہ والے گروپوں کے لیے، ایک بار جب ایک پائیدار وائرولوجیکل ردعمل حاصل کر لیا جاتا ہے، تو HCC کے خطرے پر مبنی ایک کفایت شعاری نگرانی کی حکمت عملی تیار کی جانی چاہیے، اور ابتدائی اسکریننگ HCC کی تشخیص اور علاج کو بہتر بنانے کی کلید ہے جس میں اعلی لاگت کی تاثیر کے تناسب2 ..کینسر کے لیے ابتدائی اسکریننگ کے طریقوں کی بہت سی حدود ہیں: کینسر کی زیادہ تر اقسام کے لیے ابتدائی اسکریننگ کے مؤثر طریقے تیار نہیں کیے گئے ہیں، اور اس پر عمل پیرا ہونا عام طور پر کم ہوتا ہے۔ابتدائی اسکریننگ کے روایتی طریقوں کے مقابلے میں، مائع بایپسی ٹیکنالوجی کے واضح فوائد ہیں: نمونے لینے میں آسانی، پینرک کا پتہ لگانا، نمونے کی اچھی تولیدی صلاحیت، اور ٹیومر کی نسبت کے لیے موثر ردعمل۔مائع بایپسی سے وابستہ طریقوں کی لاگت کی تاثیر کو دیکھتے ہوئے، HCC اسکریننگ میں ان کے استعمال کا معمول کے مطابق تجربہ نہیں کیا گیا ہے۔مالیکیولر سطح پر درست پتہ لگانے میں پیشرفت کے باوجود، ٹارگٹ مریضوں میں ایچ سی سی کا پتہ لگانے کے لیے فلوڈ بایپسی مہنگا پڑتی ہے، جس سے مخصوص امیجنگ طریقہ کار جیسے الٹراساؤنڈ اور مقناطیسی گونج امیجنگ کے مقابلے میں اس کے وسیع استعمال کو محدود کیا جاتا ہے۔113,114 تاہم، پچھلے مطالعے سے پتہ چلتا ہے کہ مائع بایپسی نے معیار کے مطابق زندگی کے سالوں (QALYs) کے لحاظ سے ایک اہم فائدہ دکھایا۔115 معدہ اور ناسوفرینکس کے ابتدائی کارسنوما میں مائع بایپسی کے فوائد بھی دکھائے گئے ہیں۔116,117 موجودہ نظریہ یہ ہے کہ مائع بایپسی ٹیومر کی کھوج اور تشخیص میں سیرم بائیو مارکر اور ریڈیولاجیکل اسکریننگ کی تکمیل کر سکتی ہے۔117 118
موجودہ لٹریچر کے مطابق، سیال بایپسی ٹیکنالوجی نے جگر کے کینسر کے لیے ہائی رسک گروپس کی ابتدائی اسکریننگ میں نمایاں طور پر زیادہ حساسیت اور مخصوصیت کو ظاہر کیا ہے۔سیال بایپسی کی قسم سے قطع نظر، یہ ایچ سی سی کو بغیر ایچ سی سی کے ہائی رسک والے افراد سے ممتاز کر سکتا ہے، جو جلد اسکریننگ کی اہمیت بتاتا ہے کیونکہ زیادہ خطرہ والے اور صحت مند افراد کے درمیان فرق واضح ہے۔سی ٹی ڈی این اے کی نصف زندگی مختصر ہوتی ہے اور اسے ایچ سی سی کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، اس لیے ٹیومر سے ماخوذ سی ڈی این اے میں کوئی بھی تبدیلی ٹیومر کے بڑھنے کا حقیقی وقت میں ٹھوس ثبوت فراہم کر سکتی ہے، خاص طور پر چھوٹے ٹیومر کے لیے۔سی ٹی ڈی این اے کی ایک اعلی سطح کینسر کی نشوونما اور پھیلاؤ کی نشاندہی کرتی ہے اور یہ بڑھنے اور دوبارہ ہونے کا ابتدائی اشارہ ہے۔اس کے علاوہ، ctDNA کے نتائج کی بنیاد پر، مریض انفرادی علاج اور فالو اپ حاصل کر سکتے ہیں۔119 مخصوص میتھیلیشن سائٹس ایچ سی سی اور سیروٹک نوڈولس کی ابتدائی شناخت کے لیے اے ایف پی سے بہتر مارکر ہو سکتی ہیں۔ایچ سی سی کے ریسیکٹیبل کیسز میں، سی ڈی این اے کی اعلیٰ سطح مائیکرو واسکولر یلغار اور آپریشن کے بعد کی تکرار اور میٹاسٹیسیس کی نشاندہی کرتی ہے۔کاپی نمبر میں تبدیلی HCC کے مریضوں کی بقا سے وابستہ ہے۔یہ فرض کیا جا سکتا ہے کہ ایچ سی سی کے مجموعی علاج میں سی ڈی این اے کی تشخیص شامل ہو سکتی ہے، اور سی ڈی این اے علاج کی ماڈلن کے ایک مؤثر اشارے کے طور پر کام کر سکتا ہے۔ctDNA میں مخصوص جینیاتی تغیرات پر مبنی مارکروں کو طبی رہنما خطوط کے ذریعے افادیت کی پیش گوئی کرنے اور منشیات کے خلاف مزاحمت کی نگرانی کے لیے اپنایا گیا ہے۔ابتدائی اسکریننگ کے لیے ctDNA ٹیسٹنگ سب سے مفید مائع بایپسی ٹول ہو سکتا ہے۔CTCs اعلی خطرے والے HCC گروپوں کی ابتدائی اسکریننگ میں بھی کلیدی کردار ادا کرتے ہیں۔HCC سے وابستہ CTCs کے مختلف مارکر HCC کے آغاز، ترقی اور تکرار میں خاص اہمیت رکھتے ہیں۔جھلی ویسیکلز کے طور پر، exosomes انٹر سیلولر مواصلات میں شامل ہیں، خاص طور پر HCC خلیوں میں۔گردش کرنے والے مائیکرو آر این اے خون میں مستحکم ہوتے ہیں اور اس طرح ایچ سی سی کی ابتدائی اسکریننگ کے لیے زیادہ مفید ہو سکتے ہیں۔آہستہ آہستہ، exosomal پروٹین اور RNA سے بھرپور exosomes دریافت ہوئے، اور HCC کے لیے ان کی پیش گوئی کی افادیت کی تصدیق ہو گئی۔دلچسپ بات یہ ہے کہ ایچ سی سی کی مختلف ایٹولوجیز بھی مختلف اتپریورتنوں سے وابستہ ہوسکتی ہیں، اس لیے ہم ایچ سی سی کی مختلف ایٹولوجیز کی بنیاد پر ابتدائی اسکریننگ کے لیے مختلف بائیو مارکر منتخب کرسکتے ہیں۔120
تاہم، موجودہ سیال بایپسی تکنیک استحکام کے لحاظ سے قابل اعتراض ہیں اور HCC کی ابتدائی اسکریننگ یا نگرانی کو آزادانہ طور پر انجام نہیں دے سکتی ہیں، لیکن پھر بھی انفرادی اسکریننگ اور تشخیص کی تکمیل کر سکتی ہیں۔121 مائع بایپسی کی ایک شکل کے طور پر، ctDNA، CTC، cfRNA اور exosome سے وابستہ AFP یا PIVKA-II کی کھوج اور امیجنگ HCC کی ابتدائی تشخیص اور تشخیص میں امید افزا ایپلی کیشنز ہیں۔تاہم، خون میں سی ٹی ڈی این اے کے اخراج کا صحیح طریقہ کار واضح ہونا باقی ہے۔سی ٹی ڈی این اے کی بنیادی حیاتیاتی خصوصیات کو ظاہر کرنے سے مارکر کے طور پر اس کے استعمال میں آسانی ہو سکتی ہے۔گردش میں سی ٹی ڈی این اے کی تھوڑی مقدار اور نمونے سے نمٹنے کے سخت تقاضے ایچ سی سی میں سی ڈی این اے کا پتہ لگانے کے کلینیکل نفاذ کے لیے چیلنج ہیں۔مزید برآں، جینیاتی تغیرات میں مخصوص خصوصیات نہیں ہوتیں جو کہ سرطان کے جراثیم کی درست شناخت کی اجازت دیتی ہیں۔چونکہ عام بافتوں میں متعدد جینیاتی اور صوماتی تغیرات بھی موجود ہوتے ہیں، اس لیے فلوڈ بایپسی کے ذریعے شناخت شدہ جینیاتی تغیرات ایچ سی سی کی ابتدائی اسکریننگ میں محدود افادیت کے حامل ہو سکتے ہیں۔122 اچھی طرح سے متعین مفید جین اہداف اور بائیو مارکر کی حدود جو سی ڈی این اے کو غیر ٹیومر ڈی این اے سے فرق کرنے میں مدد کرتے ہیں سی ڈی این اے کے استعمال میں سب سے اہم مسائل ہیں۔CTCs کا پتہ لگانے کے لیے حساس اور مخصوص مارکر کی افادیت کا فقدان۔میٹاسٹیٹک صلاحیت کے حامل صرف قابل عمل خلیات پائے گئے، اور CSC افزودہ مارکروں کا بہترین امتزاج واضح نہیں تھا۔ثقافت کے لیے CTCs کو الگ تھلگ کرنا اور ان کے باہمی پروفائلز کا جائزہ لینا بھی ایک مشکل کام ہے۔exosomes کی شناخت، الگ تھلگ اور صاف کرنے میں دشواریوں کی وجہ سے، مخصوص مالیکیولر میکانزم ابھی تک واضح نہیں ہے، اور exosomes اور HCC کے طریقہ کار کے بارے میں پچھلے مطالعات گہرائی میں نہیں ہیں، اور جس طرح سے miRNAs، lncRNAs، اور پروٹین کو exosomes میں ترتیب دیا جاتا ہے۔ ، اور یہ واضح نہیں ہے کہ آیا exosome اپٹیک ایک مخصوص قسم کا عمل ہے۔HCC کی تشخیص اور علاج کے لیے exosomes کا استعمال ابھی بھی ابتدائی مرحلے پر ہے۔مائع بایپسی کے طریقہ کار کی معیاری کاری کی کمی، جیسے کہ خون جمع کرنے کے لیے استعمال ہونے والی ٹیوبوں کی قسم، خون کا حجم، نمونہ ذخیرہ کرنے اور پتہ لگانے، الگ تھلگ اور افزودگی، طبی مراکز میں طریقوں میں فرق کی وجہ سے معمول کے طبی عمل میں ان کے استعمال کو روک سکتا ہے۔ابتدائی اسکریننگ، تشخیص، افادیت کی تشخیص، اور ایچ سی سی کی پیشن گوئی میں مائع بایپسی کی افادیت کو تلاش کرنا باقی ہے، خاص طور پر اعلی خطرے والے گروپوں کے لیے۔مائع بایپسی ٹیکنالوجی بڑی صلاحیت رکھتی ہے اور مستقبل قریب میں جگر کے کینسر کے کلینیکل پریکٹس میں وسیع پیمانے پر استعمال ہونے کی امید ہے۔
1. سنگ H.، Furley J.، Siegel RL et al.عالمی کینسر کے اعدادوشمار 2020: GLOBOCAN نے 185 ممالک میں کینسر کی 36 اقسام سے ہونے والے واقعات اور اموات کا تخمینہ لگایا ہے۔CA کینسر جے کلین۔2021؛71(3):209-249۔doi: 10.3322/caac.21660
2. نیشنل ہیلتھ کمیشن کا ہیڈ کوارٹر۔بنیادی جگر کے کینسر کی تشخیص اور علاج کے لیے معیار (2022 ایڈیشن) [جے]۔جرنل آف کلینیکل لیور ڈیزیز، 2022، 38(2): 288-303۔doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J، Sun H، Wang Z، et al.ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کی تشخیص اور علاج کے لیے رہنما خطوط (2019 ایڈیشن)۔جگر کا کینسر۔2020؛ 9(6):682-720۔doi: 10.1159/000509424
4. کوکوڈو این، تاکیمورا این، ہاسیگاوا کے، وغیرہ۔ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لیے کلینیکل پریکٹس گائیڈ لائنز: جاپانی سوسائٹی فار لیور ڈیزیز، 2017 (JSH-HCC 4th گائیڈ لائنز)، 2019 اپ ڈیٹ۔جگر کی بیماری کا ذخیرہ۔2019;49(10):1109–1113۔doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA، Fernandez-Garza LE، Barrera-Barrera SA دائمی جگر کی بیماری میں مائع بائیوپسی۔این ہیپاٹو۔2021؛ 20:100197۔doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu.، Tan P.Kh.مائع چھاتی کے کینسر کی بایپسی: ایک مرکوز جائزہ۔آرک پاتھول لیب میڈ۔2021;145(6):678–686۔doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. کنول ایف، ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے لیے سنگل اے جی سرویلنس: موجودہ بہترین طریقے اور مستقبل کی ہدایات۔معدے.2019؛ 157(1):54-64۔doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. یورپی ریسرچ ایسوسی ایشن ایل، یورپی تنظیم آر، سی علاج۔طبی رہنما خطوط EASL-EORTC: ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کا علاج۔جے ہیپرین۔2012؛56(4):908–943۔doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.چھوٹے ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں مفید سیرولوجیکل مارکر کے طور پر AFP اور HCCR-1 کا مشترکہ تجزیہ: ایک ممکنہ ہم آہنگی کا مطالعہ۔ڈس مارک۔2012؛32(4):265–271۔doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. چن ایس، چن ایچ، گاو ایس، وغیرہ۔ہیپاٹائٹس بی وائرس سے وابستہ جگر کی بیماری اور ہیپاٹائٹس بی وائرس سے متاثرہ ہیپاٹوسیولر کارسنوما کی تشخیصی صلاحیت میں پلازما مائکرو آر این اے 125b کا امتیازی اظہار۔جگر کی بیماری کا ذخیرہ۔2017؛ 47(4):312-320۔doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR، Foster F.، Kudo M. et al.ہیپاٹو سیلولر کارسنوما میں الفا فیٹوپروٹین کی حیاتیات اور اہمیت۔جگر int.2019؛ 39(12):2214–2229۔doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M، Cheng AL، Kokudo N، et al.ایشیا پیسیفک ریجن میں ہیپاٹو سیلولر کارسنوما کے علاج کے لیے کلینیکل گائیڈ لائنز: 2017 اپ ڈیٹ۔جگر کے امراض کے لیے بین الاقوامی تنظیم۔2017؛ 11(4):317–370۔doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei، Zhang Li، He Wei et al.ہیپاٹو سیلولر کارسنوما والے چینی مریضوں میں اکیلے یا اے ایف پی کے ساتھ سیرم PIVKA-II کی تشخیصی قدر۔ڈس مارک۔2021؛ 2021:8868370۔doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L.، Praradines A.، Basset S. et al.غیر چھوٹے سیل پھیپھڑوں کا کینسر غیر پلازما مزاحیہ سیال بایپسی: ٹیومر کے قریب!سیل2020؛ 9(11)۔doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. مائع بایپسی: موجودہ حیثیت اور مستقبل کے امکانات۔علاج Oncol Res.2017؛40(7-8):404-408۔doi: 10.1159/000478018
16. پالمیروٹا آر، لوورو ڈی، کیفوریو پی، وغیرہ۔مائع پر مبنی کینسر بایپسی: کلینیکل آنکولوجی میں ایک ملٹی موڈل تشخیصی ٹول۔ایڈو میڈ آنکول۔2018؛ 10:1758835918794630۔doi: 10.1177/1758835918794630
17. مینڈیل P.، Metais P. انسانی پلازما میں نیوکلک ایسڈ۔CR Seances Soc Biol Fil.1948؛ 142(3-4):241-243۔
18. Mouliere F، Chandrananda D، Piskorz AM، et al.ٹکڑوں کے سائز کے تجزیہ کے ذریعے گردش کرنے والے ٹیومر ڈی این اے کی اعلی درجے کی کھوج۔سائنس طب کا ترجمہ کرتی ہے۔2018؛ 10:466۔doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. انڈر ہیل HR، کٹزمین JO، Hellwig C. et al.گردش کرنے والے ٹیومر ڈی این اے کے ٹکڑے کی لمبائی۔PLOS جینز۔2016;12(7):e1006162۔doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. گردش کرنے والا ٹیومر DNA: مائع پر مبنی کینسر بایپسی میں ایک امید افزا بائیو مارکر۔ہدف ٹیومر.2016؛7(30):48832–48841۔doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.انسانی بدنیتی کے ابتدائی اور آخری مراحل میں گردش کرنے والے ٹیومر ڈی این اے کا پتہ لگانا۔سائنس طب کا ترجمہ کرتی ہے۔2014؛6(224):224ra24۔doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. ٹھوس کینسر کے میوٹیشنل پیشن گوئی کے تجزیہ کے لئے میہس جی مائع بایپسی: ایک پیتھالوجسٹ کا نقطہ نظر۔جے بائیو ٹیکنالوجی۔2019؛ 297:66-70۔doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[پب میڈ] 23. لینارٹس ایل، ٹوویری ایس، یاتسینکو ٹی، وغیرہ۔گردش پلازما ڈی این اے اسکریننگ کے ذریعے ابتدائی ٹیومر کا پتہ لگانا: ہائپ یا امید؟بیلجیئم کا طبی قانون۔2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. نشیدا این۔ ہیپاٹائٹس وائرس کا اثر اور ڈی این اے میتھیلیشن پر ہیومن ہیپاٹو کارسینوجنیسس۔ہسٹوپیتھولوجی۔2010؛ 25(5):647–654۔doi: 10.14670/HH-25.647